复习思考 试述萃取分离技术的种类及其原理。 影响有机溶剂萃取的因素有哪些？ 举例说明超临界流体萃取技术在工业中的应用？ 举例说明双水相萃取技术生物工业中有何应用？ 液－固浸取技术的操作有何特点？ 实验二 溶剂萃取法提取与 精制红霉素 目的要求 原理 材料用具 6ml乙酸丁酯 红霉素软膏2g 调PH7.2 ～8.0 抽滤 澄清溶液 乙酸丁酯 乙酸丁酯 酸化PH为3.5～6.0 萃取 收集下相液＋饱和食盐水 两次 两次 乙醇-醋酸钾 异丙醇 萃取 上层液 过滤 粗品 清洗干燥 精制品 静置30min 思考 题 实验三 牛血清白蛋白在双水相萃取系统中的分配 目的要求 原理 原理 材料用具 1、配制牛血清白蛋白溶液：浓度1 g/L。 2、配制高浓度的聚合物和盐的母液：PEG6000浓度为400 g/L、硫酸铵400 g/L各20ml。 3、按预先设计好的总组成，由母液配制相应的高聚物子液（60g/L、100g/L、140 g/L）和盐的子液（140 g/L、140 g/L、140 g/L）各4ml。 4、将配制好的高聚物和盐的子液转移至10ml离心管中，再加入牛血清白蛋白溶液2ml，共三组。离心管封口后，反复倒置5～10min，每min 6～10次，使溶液充分混合 5、在1500r/min下离心3～5 min后，观察成相情况。并记录。 6、小心地将目标物用吸管吸出，加入双缩脲试剂进行定性鉴别。 思考 题 双缩脲反应是指蛋白质在碱性溶液中与二价铜离 子结合，生成紫红色络合物的反应。双缩脲是由 两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与 硫酸铜反应生成紫红色络合物。含有两个或两个 以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含 有多个肽键，因此有双缩脲反应，其颜色的深浅 与蛋白质的含量成正比。可利用此反应对蛋白质 进行定性鉴别。 牛血清白蛋白 PEG6000、硫酸铵、硫酸铜、酒石酸钠钾、氢氧化钠、 蒸馏水、双缩脲试剂 双缩脲试剂其的制备如下： 溶解0.15g硫酸铜和0.6g酒石酸钠钾于50ml蒸 馏水中，在搅拌下加入30ml 10%氢氧化钠溶液， 用水稀释到100ml，备用。 操作方法 1、双水相萃取蛋白质的优点是什么？ 2、影响双水相成相的因素有哪些？ 概念 超临界流体(SCF)是指在临界温度（Tc）和临界压力(Pv)以上的流体。高于临界温度和临界压力而接近临界点的状态称为超临界状态。 种类 二氧化碳 一氧化亚氮 甲醇 乙烷 氨和水 压力 温度 流体密度 容积比 颗粒度 夹带剂 萃取剂的溶解能力易于通过调节温度和压力控制； 可在低温和无氧下操作，不破坏提取物中的活性组分，较适于热敏性 物 质的萃取； 可较快地达到平衡，萃取速率快，生产周期短； 溶剂可回收且简单方便，无溶剂残留； 萃取剂可重新使用，不产生三废，不污染环境。 超临界CO2萃取柑橘香精油的设备流程示意图储罐 2.高压泵 3.萃取釜 4，5，6.阀门 7，8，9.分离釜 10.回流阀 定义 利用 物 质在互不相溶的两相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 影响因素 分离物质 实例 体系 蛋白质 从奶酪中分离β乳球蛋白 PEG/磷酸盐 从转基因羊乳中纯化药物蛋白 PEG/硫酸铵 酶 从细胞培养液中提取脂肪酶 PEG/磷酸盐 从发酵液中分离提取α-淀粉酶和蛋白酶 PEG/硫酸铵 从发酵液中分离提取葡萄糖苷酶 PEG/硫酸铵 过氧化氢酶的分离 PEG/葡聚糖 核酸 DNA、RNA的分离 PEG/葡聚糖 抗生素 从发酵液中萃取丙酰螺旋霉素 PEG/磷酸盐 从发酵液中提取青霉素 PEG/硫酸铵 多糖 微生物牛乳糖的纯化 PEG/磷酸盐 线性和环状低聚糖的分离 PEG/磷酸盐 色素 从猪心中提取细胞色素C PEG/硫酸铵 抗体 从禽卵黄中提取IgG抗体 PEG/磷酸盐 双水相萃取技术在生物分离中的应用实例 反微团萃取 液膜萃取 反微团萃取（reversed micellar extraction）的研究始于20世纪70年代，但直到80年代才引起人们的重视。目前，该技术发展尚不成熟，是一种发展中的生物分离技术。 本质仍然是液-液有机溶剂萃取。 用途 氨基酸、肽和蛋白质的分离纯化 液膜萃取法又称液膜分离法，是一种以液膜为分离介质、以浓度差为推动力的分离操作。它是利用膜的选择透过性，使料液中的某些组分透过液膜进入接受液，然后将三者分开，从而实现料液组分的分离。 液膜萃取实际上是三个液相所组成的两个界面上的传质分离过程，是萃取与反萃取的结合。 液膜种类 乳状液膜 支撑液膜 流动载体 膜增强剂 常见的支撑液膜组件 萃取操作示意图 萃取、洗涤和反萃取操作过程示意图 单级萃取示意图 多级错流萃取示意图 多级逆流萃取示意图 黑龙江生物科技职业学院 生物制药技术 生物分离技术 主讲人：张爱华 实验原理 2 材料用具 3 操作方法 4 目的要求 2 1 5 5 注意事项 掌握溶剂萃取法提取微生物药物的原理和方法 掌握溶剂萃取法提取微生物药物的步骤和操作要求 红霉素属大环内酯类抗生素，可在碱性条件下 溶于乙酸乙酯有机溶剂中，在酸性条件下溶于 水溶液中，在乙酸乙酯相中可成钾盐沉淀析出。 2g红霉素软膏 乙酸、乙酸乙酯（BA）、饱和食盐水、异丙醇、乙醇-醋 酸钾溶液（配制方法：取醋酸钾10g溶于100ml于水乙醇中， 配成饱和溶液，现用现配） 量杯、烧杯、布氏漏斗及配套抽滤瓶、培养皿、 分液漏斗、铁架及铁圈、玻璃棒、镊子、剪刀、 不锈钢扁匙、PH试纸、滤纸及纺绸布、真空烘箱。 操作方法 注意事项 1、通过调节溶液的pH值使红霉素转入有机溶剂相 或水相，应注意控制溶液的pH值。 2、注意萃取时避免乳化现象。 1、常用的萃取溶剂有哪些？ 2、为何选用饱和食盐水？ 实验原理 2 材

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